一九九九年，当时正忙于复习文化课、准备报考北京电影学院表演系的于博，参演了电影《男男女女》，并在其中担纲男主角小博一角。值得庆幸的是，拍摄工作并未影响他的学业进程。当这部电影在瑞士洛迦诺国际电影节荣获国际影评人大奖之际，他也同步收到了北京电影学院表演系的录取通知书，可谓双喜临门。二零零一年，他再次出演电影《丑角登场》，依然饰演名为小博的男主角。该片先后入围了第三届韩国全州国际电影节、第二十一届加拿大温哥华国际电影节以及第三十二届荷兰鹿特丹国际电影节，获得了国际影坛的广泛关注。二零零二年，于博参演电影《旧约》，继续担任男主角小博。这部作品成功入围了第五十三届柏林国际电影节全景单元竞赛，进一步奠定了他在艺术电影领域的形象。二零零四年，他在电影《蔓延》中饰演男一号申明，该片亦入选了第三十三届荷兰鹿特丹国际电影节展映。二零零六年，于博转型幕后，在情感剧《跟着阳光跳舞》中担任导演助理，积累了宝贵的创作经验。二零一一年，在作品《新版水浒传》中，他饰演双枪将董平，其表演不仅精准到位地刻画了这位有情有义、骁勇善战的将领形象，更为这一传统人物注入了全新的精神内涵，展现出深厚的角色塑造能力。二零一七年，他参演了公安题材网络剧《南海·四大名捕之谌捕头》。二零二三年三月九日，于博登上歌剧舞台，参演了原创民族歌剧《呼儿嘿哟》。进入二零二五年，其影视作品持续与观众见面：四月十五日，参演的电视剧《悬镜》正式播出；同年十二月二十八日，另一部由其参演的电视剧《不期而遇的生活》也如期播映，持续活跃于大众视野之中。
《教父/哈姆雷特》饰演：意大利出租车司机
《呼儿嘿哟》饰演：杜学丁
《MASS》 饰演：小博（男主角）
在全新推出的《水浒传》中，演员于博精彩诠释了双枪将董平这一经典角色。他不仅精准把握了人物有情有义、骁勇善战的传统特质，更通过细腻深入的表演，为这一形象注入了富有层次感的现代解读与全新的精神内涵，使得董平的英雄气概与内心世界得到了更为饱满而立体的呈现。