1967年1月31日，王祖贤出生于中国台北市。她自幼便展现出对体育运动的浓厚兴趣，尤其热衷于篮球活动；年仅12岁时，她就已经成为台湾一家公司旗下女子篮球队的职业前锋，在球场上持续征战了整整三年时光。15岁那年，一位广告商向王祖贤发出邀请，请她拍摄了一则化妆品广告。在这次拍摄过程中，她所呈现出的健康、纯洁的形象深深打动了摄影师宋立平，也正是在这段经历里，王祖贤自身开始萌发并逐渐积累起对表演艺术的向往与热情。在顺利完成初中学业后，王祖贤通过考试进入了台湾国光艺校，正式开始了她在影剧专业领域的系统学习与深造。
一九八五年，年仅十七岁的王祖贤出演了她的首部电影作品《今年湖畔会很冷》。这位初露锋芒的新人立刻引起了香港邵氏电影公司的注意，公司对她极为赏识，随即以优厚的薪酬条件邀请她前往香港发展演艺事业。就在同一年，她与演员尔冬升合作，共同主演了喜剧电影《天官赐福》，在片中她塑造了一位崇尚婚姻自主、试图通过女扮男装来逃避包办婚姻的富家小姐纳兰琼瑶的形象；同年八月，她又参演了新艺城影业有限公司制作的喜剧片《打工皇帝》。进入一九八六年，她的演艺步伐明显加快：三月，她担纲主演了由陈欣健与刘观伟两位导演联手执导的动作影片《霹雳大喇叭》；四月，在楚原导演的爱情电影《偶然》中，她饰演了美貌动人却背负着不为人知秘密的女性角色茱莉亚；六月，她与钟镇涛、周润发两位知名演员联袂出演了喜剧片《杀妻二人组》；到了十月，她再次与周润发合作，并加入吕方，共同主演了动作片《义盖云天》，在片中她生动诠释了一位从内地偷渡至香港、却不幸沦落街头无依无靠的少女港生；十一月，她领衔主演了剧情片《心动》，成功刻画了一位性格乐观开朗、在工作中积极进取的广告公司撰稿主任凌祖儿。 时间来到一九八七年，王祖贤与歌手齐秦共同主演了爱情电影《芳草碧连天》，她在片中扮演农业专科学校毕业的技术员凌云峰，并且还参与了该片电影主题曲《花祭》音乐录像带的拍摄；一月，她主演了改编自同名小说的科幻题材影片《卫斯理传奇》；七月，她与巨星张国荣联合主演了爱情片《倩女幽魂》，这部影片是对二十世纪六十年代同名电影的重新演绎，王祖贤在片中饰演了姿容绝世、内心善良，却被迫受树妖操控害人的女鬼聂小倩，她凭借这一深入人心的角色获得了第七届香港电影金像奖最佳女主角的提名，演艺事业登上新的台阶；八月，她领衔主演了剧情片《香港小姐写真》，在片中出演了一位当选香港小姐的青春少女李倩蓓。 一九八八年三月，王祖贤在奇幻电影《画中仙》中担任主角，饰演了因不堪受辱而跳崖自尽、最终魂魄寄居于画像之中的幽魂莫愁；同年七月，她参演了由刘镇伟执导的喜剧电影《金装大酒店》；七月七日，她主演的爱情电影《长短脚之恋》正式上映，她在片中挑战了一位下肢残疾、需要悉心照料父亲的坚强女孩阿美；十二月，她在黄泰来执导的剧情片《法中情》中，饰演了精神几近崩溃的模特凌祖儿，展现了角色复杂的内心世界；此外，她在同年还出演了喜剧片《大丈夫日记》。 一九八九年一月二十一日，王祖贤出演了由许冠文、黄百鸣主演的喜剧电影《合家欢》；四月，她与钟镇涛搭档，在动作片《杀手蝴蝶梦》中饰演了一对情侣；八月，她主演了银都机构有限公司出品的悬疑片《都市猎人》，在片中扮演生活优渥却与丈夫感情疏离、貌合神离的少妇雷茵；九月，她领衔主演了改编自同名小说的剧情片《潘金莲之前世今生》，在片中一人分饰两角，既演绎了生性放荡、死后执意不喝孟婆汤的古代少妇潘金莲，又诠释了潘金莲转世投胎后成为现代芭蕾舞团佼佼者的单玉莲，展现了其宽广的戏路；十月，她与林青霞联合主演了惊悚片《惊魂记》，在片中再次挑战一人分饰双胞胎姐妹，分别饰演了性情和善但被迫偷窃钱财的姐姐王素群，以及容貌艳丽、热衷于梳妆打扮的妹妹王素娟；十二月，她参演了由周润发、刘德华主演的剧情片《赌神》，在片中饰演了陈小刀的女友阿珍；同年，她还与郑裕玲、林忆莲共同出演了喜剧电影《打工狂想曲》，进一步丰富了她的表演履历。
一九九零年五月，她与任达华联袂出演了剧情片《浪漫杀手自由人》，于片中生动塑造了枪击案目击少女阿珍的形象；同年六月二十八日，由她主演的奇幻电影《漫画奇侠》正式公映；七月，她再度担纲主演爱情片《倩女幽魂Ⅱ：人间道》，成功诠释了身负家族深仇大恨的忠臣之女傅清风这一角色；七月二十一日，她参演的喜剧影片《摩登如来神掌》登上银幕，在片中她化身为才华横溢的元朝公主云萝；十月，她与张学友合作主演了剧情片《都市煞星》，饰演了与代号“金鹰”的杀手陷入热恋的纯真少女高加恩；至十二月，她领衔主演的剧情片《阿婴》与观众见面，她所扮演的是闾门县令的独生爱女阿婴。进入一九九一年一月，她主演的奇幻片《天地玄门》上映，她饰演了拥有绝世容颜、令鬼王为之倾慕的美女施施；四月，在黄泰来执导的爱情电影《魔画情》中，她饰演了被迫下嫁血魔的凄婉女鬼青青；六月，她与王羽联合主演了奇幻片《千人斩》，出演了前来向刽子手袁德泰寻仇的江南大盗组织“鬼八仙”成员玉残花；七月，她与梁朝伟、张学友共同主演了奇幻电影《倩女幽魂Ⅲ：道道道》，在片中她饰演了容貌美艳动人、死后葬于兰若寺、并被树妖操控被迫害人的女鬼小卓；十月，她领衔主演的奇幻片《灵狐》推出，她扮演了立志为狐族复仇、试图引诱以贩卖狐裘为业的卫家公子卫十郎的狐狸精胡雪姬；十一月三十日，她参演的喜剧电影《豪门夜宴》如期上映。一九九二年二月，她出演了由王晶执导的剧情片《赌城大亨之新哥传奇》，在片中饰演了傅家骏的妻子程乐儿。一九九三年，她参演了长宏影视股份有限公司出品的古装影片《新流星蝴蝶剑》，饰演了与杀手孟星魂心灵相契的妻子小蝶；一月十六日，她与林青霞合作拍摄的武侠电影《东方不败风云再起》上映，她饰演了日月神教教主东方不败那位对爱情无比坚贞的妾侍雪千寻；二月，在刘镇伟执导的喜剧片《射雕英雄传之东成西就》中，她饰演了黄药师的小师妹素秋；五月，她与梁家辉、徐锦江联合主演了古装片《水浒传之英雄本色》，在片中她塑造了性情温柔贤淑、时常劝诫丈夫远离险恶官场的林冲妻子形象；九月，她主演了由胡金铨执导的恐怖电影《画皮之阴阳法王》，饰演了不幸遭雷击身亡的戏子尤枫；十一月四日，她与张曼玉共同主演的奇幻影片《青蛇》隆重上映，该片改编自同名古典小说，她在片中精彩演绎了天性仁慈善良、修行已达千年的白蛇白素贞。
一九九四年，王祖贤逐渐减少了演艺活动，将生活重心转向了个人领域。至一九九七年，她与演员绪形直人合作，共同主演了科幻题材影片《北京猿人》，在片中她成功塑造了身手矫捷、果敢坚毅的女特工宗美美这一角色。次年三月，她推出了个人音乐专辑《与世隔绝》，展现了其在歌唱领域的才华；同年，她还参与了歌曲《悬崖》音乐录像带的演出，进一步丰富了其艺术实践。二零零一年四月六日，由她与宫泽理惠联袂主演的爱情电影《游园惊梦》正式公映，王祖贤在片中饰演荣家的亲戚、一位在民国时期任教的教师荣兰，其表演细腻传神，该片因其艺术成就获得了广泛好评，更被美国权威杂志《时代》评选为年度十大电影之一。二零零五年，她主演了由导演彭小莲执导的剧情片《美丽上海》，在片中诠释了一位在美国工作的电子工程师的形象；也是在这一年，她正式宣布全面退出演艺圈，结束了其辉煌的演艺生涯。直至二零二六年一月二十七日，王祖贤再度引起公众关注，她开通了新的个人社交账号并发布了首条视频，与久违的影迷们重新建立了联系。
王祖贤女士的父亲王耀煌先生早年曾是一名专业的篮球运动员，并代表台湾篮球队参加过比赛。他于2016年11月29日，因体内癌细胞发生扩散与转移，经医治无效，最终在台北不幸病逝。
一九八七年，女演员王祖贤因参与电影《芳草碧连天》的拍摄工作而与知名歌手齐秦相识，两人随后展开了一段备受瞩目的恋情。然而到了1993年，王祖贤主动向齐秦提出分手，转而与已有家庭的商人林建岳发展出一段婚外感情，此事在当时引发了诸多议论。1996年，王祖贤与林建岳的关系结束；此后她与旧爱齐秦重新取得联系，双方感情再度升温并决定复合。1998年，齐秦与王祖贤的关系趋于稳定，两人共同在台北市选购房产，开始为未来的婚姻生活进行实质准备。但这段感情并未能顺利走向终点，2003年，齐秦的前妻突然提出要求，希望齐秦承认并抚养两人所生的儿子，此事导致了齐秦与王祖贤之间产生难以调和的矛盾，最终他们再度选择分手，为这段长达十余年的分合纠葛画上了句号。
二零二五年二月二十四日，知名艺人王祖贤通过个人社交平台发布了一条视频动态，向一直以来关心她的广大粉丝正式宣布，自己已经创办了一家专注于艾灸调理的养生会馆。她在视频中坦诚地表示，自从淡出娱乐圈之后，投身于艾灸健康事业便成为她内心最渴望实现的人生规划。到了二零二六年，已经定居加拿大温哥华并成功经营艾灸馆的王祖贤，首次开通了专属的社交媒体账号，不仅借此平台分享了多张展现近期生活状态的个人照片，还特别发布了一段记录她因业务需要前往美国硅谷进行短期出差行程的日常vlog，让关注她的网友们能够更直观地了解其当下的生活与工作面貌。
一九九三年，知名影星王祖贤在回到故乡寻访家族根源并完成祭祖仪式后，怀着对故土的深厚情谊，于安徽省舒城县石岗镇的家乡慷慨捐资十万港元，用于支持当地的基础设施建设。这笔捐款最终被用于修建该镇历史上的第一条柏油马路，极大地改善了乡亲们的出行条件，也为当地的经济发展带来了切实的便利。时隔多年之后，在二零二五年四月二十六日，王祖贤再度公开亮相，出席了第十届国际灸法大会，这一举动展现了她对中华传统医学文化的关注与支持，也体现了其个人生活重心与兴趣的延伸。
王祖贤无疑是华语影坛中一位极为罕见且天赋卓越的优秀演员，尤其是在个人气质的塑造与呈现上，几乎鲜有同辈或后辈能够达到她的高度。她身上那种独特的冷艳气质，令其格外适合诠释那些内心复杂、性格内敛或兼具冰火双重特质的女性角色。而在现实生活里，王祖贤却展现出率真爽朗的个性，为人处事极有原则，这种反差更增添了她的个人魅力。作为一名演员，她拥有非常出色的镜头感知力，无论是动态表演还是静态拍摄，都能展现出深邃而富有故事感的韵味，这也使得她在业内被公认为“最受记者欢迎的女星”之一。回顾上世纪九十年代，在众星璀璨的香港影坛，王祖贤位列公认的“九大绝色女星”之中，其惊艳脱俗的容貌与风采至今仍令人难以忘怀。作为九十年代初香港电影界“四大名旦”之一，她凭借高挑修长的身形与出众非凡的美貌，赢得了“亚洲第一美腿”与“亚洲第一美女”的美誉。她是一位集梦幻般的神秘、醉人的风情与不染尘俗的出尘气质于一身的女明星，而“媚”之一字，仿佛成为她最为贴切也最具代表性的注脚。
根据香港媒体的相关报道，知名艺人王祖贤于2013年8月下旬曾悄然返回香港，然而其公开露面时的容貌状态却引发了外界关注。在8月22日傍晚时分，王祖贤与几位友人一同出现在香港铜锣湾一带，期间进行了逛街、饮茶等活动。当时她的面部呈现出异常的浮肿现象，眼睛与鼻子的轮廓显得不够自然，两侧颧骨的位置也看起来不太对称。尽管面对现场记者的镜头，王祖贤仍保持友善态度，主动挥手并尝试展露微笑，但仔细观察仍可发现其面部肌肉的运动显得较为僵硬，随后在同行的女性友人协助下离开了现场。这一系列画面经香港部分媒体刊出后，引发了不少猜测，甚至有报道直接推测王祖贤可能曾接受“整容”手术。 事件发生后不久，已于9月初返回加拿大居住的王祖贤，正式通过法律途径作出回应。她委托律师向香港高等法院提起诉讼，指控香港壹传媒集团旗下出版的三份刊物，在当年8月23日至26日期间，先后刊登了共计六篇相关报道。王祖贤方面认为，这些文章内容涉及对其“整容”传闻的不实描述与影射，已构成诽谤，并对她的个人声誉及演艺事业造成了实质性损害。在入禀状中，王祖贤要求法庭颁令，禁止壹传媒及相关报刊、杂志继续以印刷或网络形式发布任何涉嫌诽谤的内容，同时并就此事所导致的损失向被告方提出经济赔偿的诉求。