一九七六年，马伊琍出生于上海一条寻常的弄堂之中。彼时“文革”刚刚落下帷幕，她成为中国最早一代的独生女。童年时期，她曾坦言自己最大的愿望是成为一名公交车售票员，在她纯真的眼中，这份工作不仅能售卖车票，还掌握着车门的开合，显得既有趣又拥有小小的权威。十五岁那年，她加入了上海电视台旗下的综艺舞蹈队，由此开始了自力更生的生活。当时她通过演出获得的报酬，不仅足以完全支付自己在学校的各项学费，还能留下相当一部分结余，这让她早早体会到了经济独立的成就感。一九九三年，马伊琍有幸被选中，担纲主演电影《叛逆大师刘海粟的故事》，这是她人生中首次“触电”经历，并因此获得了八百元人民币的片酬。到了1994年，由于对数学学科缺乏足够的兴趣与热情，马伊琍在高考选择志愿时，特意报考了无需考核数学科目的上海戏剧学院，从而踏上了专业的表演艺术求学之路。
一九九六年，马伊琍出演了个人首部电视剧作品《真空爱情记录》，在剧中饰演女二号夏文心，这部作品被视为中国内地首部偶像剧，标志着其演艺生涯的正式开启。一九九八年，她从上海戏剧学院表演系顺利毕业，并在同年担纲主演了电影《玻璃是透明的》，开始在大银幕上崭露头角。次年，她主演了青春励志题材的电视剧《理想万岁》，进一步积累了表演经验。二零零一年，她将工作重心转向家庭伦理剧领域，主演了作品《给我一支烟3：今夜无眠》。二零零二年九月，她参演了由管虎执导的剧情电影《西施眼》；同年十一月，她又在一部古装剧《铁齿铜牙纪晓岚续》中成功塑造了颜如玉这一角色。二零零三年七月，她与古巨基等演员联袂出演了琼瑶剧《还珠格格第三部：天上人间》，凭借剧中明珠格格夏紫薇一角而被广大观众所熟知，知名度显著提升。同年九月，她在李亚鹏主演的情感剧《谁都会说我爱你》中出演了女二号林菊若；十月，她再次与导演管虎合作，主演了悬疑剧《七日》。二零零五年九月，她主演了一部都市情感剧《五妹》。二零零六年二月，她与陈建斌等人共同主演了古装商战剧《乔家大院》，在剧中饰演江雪瑛，并凭借这一角色的出色演绎，荣获了第二十三届中国电视金鹰奖观众喜爱的女演员奖。同年四月，她与黄磊等人合作，主演了民国背景的情感剧《天一生水》；十月，她又主演了一部古装剧《锦衣卫》。二零零七年五月，她与佟大为等人共同主演了青春励志剧《奋斗》，因成功塑造了独立自信的夏琳一角而获得了更多关注与喜爱，并凭借该剧先后斩获了二零零七年BQ红人榜年度艺术红人奖，以及二零零八至二零零九年风尚权力榜风尚最受欢迎女演员奖；同年九月，她主演了剧情片《江北好人》，并凭借在此片中的精湛表演，获得了第二届华鼎奖中国年度影视表现最佳女演员奖等多个奖项。二零零八年十月，她主演了一部年代剧《美丽无声》；十一月，她在怀孕期间拍摄完成的情感剧《锁春记》正式首播。二零一零年八月十六日，她与佟大为等人再度合作主演的情感剧《婚姻保卫战》播出，马伊琍凭借该剧获得了第一届亚洲彩虹奖最佳女喜剧演员奖；八月十八日，她主演的年代商战剧《经纬天地》在中央电视台八套黄金强档首播，这部作品是她产后复出所接拍的首部电视剧，具有重要意义；同年十月，她主演了青春励志剧《青春期撞上更年期》，并凭借该剧获得了优酷影视指数盛典——二零一一年开年盘点之开年优酷指数最佳女演员奖。二零一一年四月，她与范伟等人共同主演了喜剧电影《跟踪孔令学》，并凭借此片获得了第三届英国万像国际华语电影节优秀女配角奖。七月，她与涂松岩共同领衔主演了都市情感剧《双城生活》，并凭借该剧获得了二零一一年国剧盛典年度最佳女演员奖。二零一二年六月，她与李晨共同主演了情感剧《风和日丽》。二零一三年三月二十九日，马伊琍在二零一二中国电视剧年度明星盛典中荣获表演突破奖；同年九月，她与文章共同主演了都市情感剧《小爸爸》，该剧也是她首次尝试担任制片人，展现了其在影视制作领域的拓展。二零一五年十一月，她主演了都市情感剧《北上广不相信眼泪》，并凭借该剧获得了第十九届华鼎奖中国百强电视剧最佳女主角奖。二零一六年九月，她与陈建斌再次合作，共同主演了都市情感剧《中国式关系》，并凭借该剧提名了第二十三届上海电视节白玉兰奖最佳女主角奖。二零一七年三月，她与文章共同主演了谍战剧《剃刀边缘》；同年七月，她主演了都市情感剧《我的前半生》，在剧中饰演经历人生转折的罗子君，这一角色深入人心，并助她斩获了第二十四届上海电视节白玉兰奖最佳女主角等多个重要奖项。七月二十七日，她参演了“建国三部曲”系列电影的第三部《建军大业》。二零一八年九月三日，她与何赛飞等人共同主演了电影《那些女人》，并凭借该片获得了第二十一届上海国际电影节电影频道传媒大奖最受传媒关注女配角奖；九月十四日，她与王学兵共同主演了剧情片《未择之路》，并凭借此片获得了第七十五届威尼斯国际电影节“聚焦中国”单元焦点女演员奖；十月五日，她与姚晨共同主演了剧情片《找到你》，并凭借该片一举获得了第十届中国电影导演协会二零一八年度奖年度女演员奖、第二十五届华鼎奖中国电影最佳女主角奖等多项殊荣。二零一九年五月，她与富大龙等人共同主演了电影《进京城》，并凭借该片提名了第二十一届上海国际电影节电影频道传媒大奖最受传媒关注女主角奖；同年九月，她与刘烨共同领衔主演的都市创业剧《在远方》播出，并凭借该剧提名了第二十六届上海电视节白玉兰奖最佳女主角奖。二零二零年五月，由马伊琍等人领衔主演的都市职场剧《在不安的世界安静地活》正式杀青；同年八月，她与高伟光共同领衔主演的民国情感剧《旗袍美探》实现了网络与电视台同步播出，并凭借该剧获得了第二十九届华鼎奖中国近现代题材电视剧最佳女演员奖。二零二一年十二月，她与徐峥等人共同主演了爱情电影《爱情神话》，并凭借该片提名了第三十三届华鼎奖中国电影最佳女主角奖。二零二二年八月，她作为嘉宾加盟了综艺节目《跃上高阶职场》。二零二三年四月十五日，她领衔主演的电视剧《龙城》与观众见面。十二月五日，她参加了活动《2023微博视界大会》；十二月十七日，她又出席了《腾讯视频星光大赏》；十二月二十七日，她主演的电视剧《繁花》正式播出。二零二四年二月十日，她凭借在电视剧《繁花》中的出色表现，荣获了第二届中国电视剧年度盛典年度女演员奖。五月七日，她主演的剧集《我的阿勒泰》播出，并凭借该剧获得了“时尚芭莎·二零二四年度突破影视女演员”荣誉。六月一日，她凭借在电影《爱情神话》中饰演的李小姐一角，获得了中国电影导演协会二零二一年度女演员提名。七月十一日，她主演的电视剧《错位》播出；同月底，她凭借作品《繁花》入围了“首尔电视剧大赏二零二四”最佳女主角奖项。九月，她参加了《2024海浪电影周》并担任了荣誉评审团成员。十二月二十五日，二零二四年度上海市艺术系列高级职称评审委员会评审通过人员名单开始公示，马伊琍获评国家一级演员，公示期至二零二五年一月一日。二零二五年三月十九日，她参加了《2025电视剧品质盛典》。七月十八日，她主演的电影《花漾少女杀人事件》上映。二零二六年一月，她主演的悬疑犯罪剧《余红》正式开机投入拍摄。
马伊琍的母亲是幼儿园老师。
二零零五年，演员马伊琍与文章因共同参与电视剧《锦衣卫》的拍摄工作而初次结识。到了二零零六年，两人在再度合作电视剧《奋斗》的创作过程中，关系逐渐升温，并由此正式确立了恋爱关系。二零零八年一月三十一日，这对恋人选择步入婚姻殿堂，正式登记结婚。同年九月二十日，他们迎来了第一个女儿，取名为文君竹。二零一四年一月，马伊琍的第二个孩子也平安出生。然而，就在同年三月二十八日，部分媒体意外拍摄并公开了文章与另一位女演员姚笛共同相处的画面，引发了公众的广泛关注。面对舆论，文章于三月三十一日凌晨通过其个人新浪微博账号公开发布声明，承认了自己与姚笛之间存在婚外恋情，并就此事向家人表达了诚挚的歉意。随后，马伊琍亦通过微博作出了回应，她写下了“恋爱虽易，婚姻不易，且行且珍惜”这句话，引发了社会的诸多讨论。就在同一天晚间，最早披露文章出轨相关消息的媒体《南都娱乐周刊》的执行主编谢晓，借助微访谈这一平台在线与广大网友进行了交流，详细讲述了该媒体追踪报道此次婚外情事件背后的诸多幕后情况。四月一日，马伊琍的父亲也通过新浪微博发声，明确表示女儿马伊琍与文章并不会因此事而离婚，并透露文章已经得到了他们全家人的谅解。时光流转，直至二零一九年七月二十八日下午，马伊琍与文章最终通过官方渠道正式对外宣布，两人已结束婚姻关系，为这段备受瞩目的感情历程画上了句号。
自2004年起，马伊琍便长期投身于各类公益事业与社会活动。当年，她被中华骨髓库正式聘请为爱心大使，不仅积极参与宣传，还主动抽取了造血干细胞并留存了8毫升血样，以此加入中华骨髓库的志愿捐献者行列，随时等待为需要配型的病患提供帮助。2009年9月25日，鉴于她在环保领域的持续贡献，马伊琍在无锡荣获了2009年度“中国国际年度绿色风云人物”称号，该奖项旨在表彰她多年来积极投身“保护环境，关爱地球”系列公益行动的突出表现。2010年6月26日，她与文章共同发起了一项专注于自闭症儿童援助的“We Can”艺术慈善计划，该计划在北京正式启动，通过艺术教育等方式为自闭症儿童提供支持。次年，即2011年，马伊琍又应邓飞等媒体人之邀，代言了“免费午餐”公益项目，借助自身影响力呼吁社会关注并帮助贫困地区儿童获得每日营养午餐。 2012年10月23日，在电影《三个未婚妈妈》的首映礼上，马伊琍被授予南通城市形象宣传大使的聘书，承担起推广城市文化的责任。2013年2月，她通过天使妈妈基金平台，向急需进行肝脏移植的儿童向俊宇捐赠了四万元人民币，助力其医疗救治。2015年成为她公益履历中的重要一年：10月22日，马伊琍被联合国儿童基金会（UNICEF）正式委任为中国大使，致力于推动儿童权利保护工作；同年12月17日，在俄罗斯驻华大使馆举行的座谈会上，她与黄晓明、许晴作为中国电影界代表，受到了到访的俄罗斯总理德米特里·阿纳托利耶维奇·梅德韦杰夫的接见。 2016年9月，由《南方人物周刊》杂志主办的第十二届中国青年领袖致敬盛典于北京举行，马伊琍在典礼上获颁“2016中国青年领袖”奖项，以肯定其在专业领域与社会公益方面的双重引领作用。2018年1月31日，《中国慈善家》权威发布了“2017中国慈善名人榜”，马伊琍位列该榜单第22名。2019年6月，她以专业身份受邀担任第25届上海电视节白玉兰奖的评委。2021年7月，当河南遭遇特大暴雨灾害时，马伊琍第一时间向灾区捐款五十万元，用于紧急救援与灾后重建。 2023年12月，她再度以评审身份参与重要影视活动，成为第五届海南岛国际电影节金椰奖剧情长片评委会的成员。进入2024年，她的公益角色进一步拓展：5月29日，新疆维吾尔自治区文化和旅游厅通过官方公众号宣布，在近期召开的2024年自治区国际旅行商大会上，马伊琍被授予“新疆文化旅游宣传大使”称号，将为推广新疆文旅资源贡献力量。2025年，她的公益与专业活动仍在继续：9月22日，官方宣布她将担任第九届平遥国际电影展“费穆荣誉”单元的评审；随后在11月29日，马伊琍携手韩红基金会，向香港大埔火灾灾区捐赠善款一百万元人民币，该笔捐款定向用于受灾居民的临时安置、过渡期生活保障以及必要物资的补给。 除了广泛的公益参与，马伊琍的职业身份也颇为多元，她是上海话剧艺术中心演员俱乐部的演员，同时也担任上海市徐汇区政协委员，在文化艺术领域与公共事务中均发挥着积极作用。
在马伊琍清晰而标准的发音之中，始终萦绕着上海人讲普通话时那种特有的韵律与节奏感；她的笑声十分爽朗明快，但嘴角扬起的弧度却依然带着几分江南女子特有的含蓄与矜持，她的肤色并非那种冷调的白皙，反而更像玫瑰赤豆糕外包裹的那层糯米纸，透出细腻莹润的质感，隐隐泛着光泽。一言一行、一举一动之间，她依然保留着上海囡囡的本色——有风情却不张扬，有脾气却不摆架子，有些无伤大雅的小缺点，反而显得更加真实可亲。身处影视圈这样一个名利与浮华来得过于迅猛的行业，许多人容易在光环中迷失自我最初的模样，然而马伊琍却仿佛始终戴着一层无形的“真空面罩”，正因为不为外界的诱惑所动摇，她才活得格外从容自在，踏踏实实地花费自己通过辛勤工作赚来的每一分钱，如同寻常人一般经营着自己朴素而充实的生活。马伊琍身上最令人难以忽视的细节是她的睫毛，纤长而自然微卷，如扇子般疏密有致地展开。当她凝神思考或专注倾听时，那浓密的睫毛就像一层朦胧的雾霭，轻轻半掩在眼眸之上，只在间隙中透出坚定而清澈的目光，即便一时难以猜透她内心的全部思绪，也一定能感受到这个女人骨子里那种不容置疑的刚毅与主见，令人不由得心生敬意，不敢轻易怠慢或亵渎。这样的女性，自然而然地散发着一种吸引人的魅力。马伊琍确实是一位可塑性极强的优秀演员。当年一部《还珠格格3》让观众看到了一个区别于传统形象的“夏紫薇”，但她并未顺势成为又一位典型的琼瑶剧女主角；转而她在《奋斗》中淋漓尽致地展现了自己真实性格中的一面——坚强、独立、敢爱敢恨，尤其是她那灿烂的笑容最具感染力；她并非只是夏琳，也不愿被简单定义为八零后女性的代言人，随后她又化身为《婚姻保卫战》中的李梅，演绎了一位充满自信、掌控自我人生的现代大女人。直至2011年的《双城生活》，广大观众惊喜地发现，这位生长于江南水乡的上海女子，竟也能将一位地道的北京姑娘刻画得入木三分、鲜活生动。在个人生活里，婚姻与母亲的身份让马伊琍变得愈发柔和与宽容，她的美不再带有距离感，而是亲切随和，宛如一阵轻柔的微风，温暖地拂过身边，让人感到舒适与安然。马伊琍在众多都市女性角色之间自如转换、不断锤炼，逐渐成长为一位演技日益纯熟的实力派演员，她在戏剧领域的成功也让她频频亮相于年末各类时尚盛典，屡次斩获时尚先锋类大奖，成为时尚界备受青睐的宠儿，无论是性感、可爱、高贵或神秘的造型，她都能驾驭得恰到好处，其多变的风格与卓越的表现力也得到了业界广泛的认可与赞誉。