赵丽娟于1965年11月9日在北京出生，她在1984年顺利考入中央戏剧学院表演系，并进入该校为中国铁路文工团特别开设的代培班进行系统学习。在完成学业后，她正式加入中国铁路文工团，成为一名专业的话剧演员，开启了她的舞台艺术生涯。
一九九七年，她因出演琼瑶编剧的古装清宫剧《还珠格格》而受到广泛关注，在剧中成功塑造了温婉贤淑、心地善良的“令妃娘娘”一角。《还珠格格》饰令妃娘娘次年，即一九九八年，她与李幼斌、侯天来等演员合作，主演了聚焦社会现实的电视剧《北京女人》，生动演绎了下岗女工方晓遇的坚韧与奋斗，并凭借这一深入人心的角色，于二零零零年荣获中国电视金鹰奖“观众最喜爱的演员”奖项。进入新世纪的第一年，她与冯远征、成方圆联袂出演了一部描绘普通人家庭生活的生活剧《离婚启示录》。二零零三年，她参演了一部关注社会敏感话题的性骚扰题材电视剧《女人不再沉默》，饰演了剧中重要角色“管桂珍”。《女人不再沉默》饰管桂珍二零零六年二月，她加盟由胡玫导演执导的民国背景商战大戏《乔家大院》，出演了乔家大奶奶曹月枝这一角色。《乔家大院》饰曹月枝二零零七年，她在一部年代剧中亮相《空巷子》，饰演了风韵独特、独立自主的单身女医生乔小昭。二零零八年，她出演了电视剧《错爱2》，在剧中扮演了名为党美艳的人物。《错爱2》饰党美艳二零零九年，她参演了由袁立领衔主演的电视剧《朋友一场》，饰演金珠一角，在剧中与刘威饰演的老毕组成了一对相濡以沫的恩爱夫妻；同年，她还与刘蓓共同主演了由张国立自导自演的电视剧《不如跳舞》，饰演了张国立所饰角色的前妻莫丽娟。二零一零年，她参演了一部家庭情感大戏《给你生命给我爱》，在剧中饰演了一位收养姐姐路桐的孩子、性格强势干练的女强人陈锦芳。二零一一年，她在电视剧《她的一生》中，塑造了一位出身贫寒、凭借自身努力白手起家、在历经种种人生挫折后最终创业成功的女企业家吴慧兰的形象。二零一四年，她参演了电视剧《孩子回国了》。二零一六年，她在电视剧《欢乐颂2》中出演，饰演了剧中关键人物“小包总”的母亲。《欢乐颂2》饰小包总的妈妈二零一七年，她参演了电视剧《外科风云》，饰演了一位病人角色赵静；同年，她还参与了电视剧《为了你，我愿意热爱整个世界》的拍摄。二零一九年十二月一日，她参演的一部都市情感轻喜剧《热爱》正式播出。二零二零年二月二十三日，她出演的都市爱情创业题材剧集《我在北京等你》开播。《我在北京等你》饰李凤英二零二一年九月七日，她出演的一部古装言情剧《君九龄》在优酷视频平台播出。同年十月二十七日，她特别出演的电影《狄仁杰之恢诡赤目》正式定档，于十一月四日在爱奇艺平台播出。二零二二年九月七日，她参演的电视剧《盛唐南诏》在云南大理举行开机仪式。二零二三年四月二十八日，她参演的电影《倒数说爱你》全国上映，在片中饰演了韩书妍的母亲一角。二零二五年六月十九日，她参演的电视剧《完美的救赎》如期与观众见面。
二零零三年，时年三十八岁的赵丽娟迎来了自己的女儿，初次成为母亲的她内心充满了难以抑制的激动与喜悦，以至于在产后整整一周的时间里，她都处于一种精神高度振奋的状态，几乎无法入睡。她的丈夫出于关切，曾请医生为她注射了一支镇定剂，希望能帮助她放松休息。然而，这支镇定剂虽然暂时缓解了她因长时间保持同一姿势而产生的腿部麻木感，却并未带来预期的睡意，反而让她的身体感觉更为轻快，精神也依旧清醒。在这样持续了八九天之后，赵丽娟才逐渐从初为人母的强烈兴奋中平复下来，慢慢适应了这份崭新而充满幸福的角色。