1999年，韩恩贞通过参演由车仁表与宋允儿共同主演的电视剧《铁汉柔情》，正式开启了她的演艺生涯。2002年，她在张娜拉、张赫主演的爱情剧《明朗少女成功记》中成功塑造了“恶女”尹罗熙一角，给观众留下了深刻印象。2004年，她与宋慧乔、Rain合作主演了爱情喜剧《浪漫满屋》，在剧中饰演李英宰的初恋情人江慧媛；这个角色表面温柔体贴，实则充满心机，在发现李英宰爱上韩智恩后屡次刺激对方，展现了复杂的人物性格。2005年，她与金载沅、柳真一同主演了偶像爱情喜剧《美妙人生》，在剧中饰演李彩英。2006年，她凭借在电视剧《首尔1945》中的出色表现，荣获KBS演技大赏女子优秀演技奖。2007年，她在SBS电视台电视剧《相爱的人啊》中饰演了电视剧编剧金善熙，这个角色在遭遇深爱男人的背叛后，选择独自抚养孩子，展现了坚韧的女性形象。 2008年，韩恩贞出演了一部以委托人和律师为核心，围绕四名男女之间的爱情与金钱展开的幽默剧《大韩民国律师》，在剧中饰演李爱利；同年，她还参演了以韩国古代兵器神机箭为故事主线的电影《神机箭》，在片中扮演洪里，她是在朝鲜王朝世宗大王设立的专门研究火药武器的部门中负责神机箭研发的研究人员。2009年，她与权相佑、林允儿合作主演了励志爱情剧《乞丐变王子》（亦称作《男版灰姑娘》），在剧中饰演韩国MOER信用金库会长的独生女儿张世恩。2010年，她因领衔主演韩国KBS电视台的纳凉特别剧《九尾狐姐姐传》，获得了KBS演技大赏迷你剧集部门优秀女演员奖。2011年，她凭借出演的奇幻悬疑剧《四百年的梦》获得KBS演技大赏特辑单幕剧奖；同年，她还领衔主演了恐怖电影《寄生灵》，在片中饰演徐长焕怀孕的妻子瑞妮。2012年11月28日，由她主演的电影《致给她》举行了新闻发布会。 2014年，韩恩贞与金康宇、李诗英共同主演了韩国KBS电视台的水木剧《Golden Cross》，在剧中饰演Golden Cross俱乐部的代表洪莎拉；同年，她还参演了韩国KBS电视台另一部水木剧《Ironman》（又名《钢铁人》），在剧中饰演男主角朱洪斌的初恋女友金泰希；同年12月，她与SidusHQ经纪公司正式签约。2023年6月24日，她参演的电视剧《榴莲小姐》正式播出。
二零零九年十月十六日，韩国知名演员韩恩贞与著名歌手Rain共同出席了在庆熙大学举办的创校六十周年纪念音乐会，两人作为表演嘉宾参与了这场具有特殊意义的校园庆典活动。时隔数年，至二零一三年六月三十日，韩恩贞再次出现在公众瞩目的体育赛事场合，她受邀在首尔棒球场举行的一场韩国职业棒球联赛中担任开球嘉宾，以其优雅的姿态为当日的比赛拉开了序幕。
韩恩贞以其热情奔放的特质与鲜明的性感魅力，成为了这个时代颇具代表性的一位艺人。她拥有1米72的高挑身姿与49公斤的纤细体重，模特出身的背景令其身材显得格外完美出众。不仅外貌秀丽动人，韩恩贞更凭借扎实而富有层次的表演功底，赢得了广大观众的认可与喜爱。在她过往参演的众多电视剧中，韩恩贞常常饰演介入他人情感的第三者类型角色，并且多数以反派一号的形象登场，这使她在观众心中留下了强烈的戏剧印象。然而，在《九尾狐：狐狸姐姐》这部作品中，她首次担纲了真正意义上的主角，塑造了一位内心绝对善良、性格坚韧不屈的女性形象。这一角色不仅深深打动了无数观众，也充分展现了韩恩贞在演技上的宽广可塑性与深厚感染力，让更多人看到了她超越以往定位的表演实力。